〔李紅玉／南京中醫藥大學 中醫內科學〕
全球每年新確診的惡性腫瘤中約有9.2％為肝癌，在肝癌的新發病例中，亞洲約占70％，其中，我國的肝癌發病率居首位，且我國HCC患者的年死亡人數占全球HCC患者死亡人數的55％左右。那些進展為HCC的患者幾乎都在12個月內死亡，證明HCC進展極快且預後極差，因此，急需尋找有效的治療藥物。
ANCA-E-D是牛樟芝的二氯甲烷提取物。臺灣當地居民一直用牛樟芝來治療食物和藥物中毒、腹瀉、腹痛、皮膚瘙癢、改善免疫和肝功能等，而現代藥理也證實，牛樟芝具有調節免疫、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化和神經保護等作用。
研究發現，牛樟芝與中藥靈芝同屬於多孔菌科的真菌，生長習性和性味相近，生物活性成分不同，尤其是牛樟芝的生物活性物質種類比單一種類的靈芝更多，且萜類和多醣等含量更高，故而近年來，牛樟芝的抗腫瘤和免疫調節等功效成為研究的熱點。
我們認為牛樟芝具有扶正補虛和抗癌解毒的雙重功效，是一種潛在的特異性的抗癌中藥。已有的研究證實，牛樟芝可以抑制肺癌、結腸癌、卵巢癌等多種腫瘤的生長。
本研究中，我們利用SMMC-7721肝癌細胞株，通過體內和體外實驗，利用基因晶片高通量的特點，初步探討牛樟芝對肝癌細胞的體內外抑制作用和分子機制。
方法：
1.體內實驗
(1)SMMC-7721細胞（4×105 cell/只）接種至4～6周齡雄性BABL/c裸鼠右後肢皮下，建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型;
(2)造模成功裸鼠隨機分為3組（10只/組）:生理鹽水對照組，25 mg/kg ANCA-E-D實驗組、50 mg/kg ANCA-E-D實驗組，腹腔注射，每天1次，連續治療21天;
(3)觀察裸鼠的一般狀況，測量各組裸鼠的體重、移植瘤體積等;血液學檢測血清ALT和AST含量;病理切片HE染色檢測移植瘤和肝腎組織，IHC檢測移植瘤組織的MVD和PCNA的表達，TUNEL檢測移植瘤組織的細胞凋亡。
2.體外實驗
(1)0、20、40、60、80 mg/L ANCA-E-D處理SMMC-7721細胞24、48、72h，MTT法檢測SMMC-7721細胞的增殖抑制率;
(2)0、20、40、60 mg/L ANCA-E-D處理SMMC-7721細胞24h，Hoechst33258及瑞氏染色觀察細胞形態;
(3)0、20、40、60、80 mg/L ANCA-E-D處理SMMC-7721細胞24h，流式細胞術(FCM)檢測細胞週期和細胞凋亡;
(4)0、20、40、60 mg/L ANCA-E-D處理SMMC-7721細胞24h，基因晶片檢測差異基因的表達;
結果：
體內實驗:ANCA-E-D可抑制裸鼠皮下移植瘤的生長，抑制裸鼠移植瘤中微血管的形成以及PCNA的表達，誘導移植瘤細胞的凋亡;ANCA-E-D對移植瘤裸鼠的ALT和AST無影響。
體外實驗:20～80mg/L劑量之間的ANCA-E-D可顯著抑制人肝癌SMMC-7721細胞的增殖;Hoechst33258及瑞氏染色發現，ANCA-E-D處理後SMMC-7721細胞出現凋亡形態改變;FCM週期檢測發現，ANCA-E-D可在一定程度上影響SMMC-7721細胞週期進程;FCM凋亡檢測發現，ANCA-E-D處理後，SMMC-7721細胞凋亡呈濃度依賴性增加。基因晶片檢測發現，ANCA-E-D3個劑量組中，共同上調的基因有422個，共同下調的基因有377個。GO功能分析，這些基因涉及細胞信號轉導、遷移、粘附、凋亡、分化、代謝、增殖、血管生成、器官發育等多方面。與凋亡相關的4倍以上的差異基因中，ANCA-E-D20 mg/L組篩選6個，40 mg/L組篩選出12個，60 mg/L組篩選出35個。Pathway分析，3個劑量組中的差異基因均參與的信號通路包括TNF signaling pathway、Calcium signalingpathway、Pathways in cancer、PI3K-Akt signaling pathway、MAPK signaling pathway、Jak-STAT signaling pathway、 Apoptosis等。
結論：
牛樟芝提取物ANCA-E-D具有體內外抗肝癌作用，其作用機制可能是通過影響EDNRA、HRK、LCN2和ANGPTL4等基因的表達，進而影響包括凋亡在內的諸多信號通路來實現的。
